爲什麽要進行細胞鑒定?
1.什麽是細胞系鑒定?
所謂細胞系鑒定即通過STR(短串聯重複序列)圖譜所建立細胞系的遺傳特征。一(yī)株細胞系的遺傳特征确立後,細胞系可以通過定期的檢測,以防止出現細胞系被誤認或交叉污染的情況。
2.爲什麽要進行細胞系鑒定?
首先進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生(shēng)物(wù)醫藥的研究都采用培養細胞來進行,這些細胞可能是受贈于其它研究人員(yuán),也可能是從細胞庫(如美國ATCC,AmericanTypeCultureCollection)得來。據估計,15-20%的實驗室,實驗中(zhōng)所使用的細胞已經不是原來的細胞系,或者與其它細胞系發生(shēng)了交叉污染。顯然,細胞系遭到污染、特征鑒别錯誤,将會極大(dà)的威脅着基于這些細胞而發表的論文質量和研究發現的正确性。爲此,很多細胞庫現在都要對提交來的細胞系進行鑒定,并對細胞系之間的交叉污染進行監測。
現在很多機構都已經認識到這個的重要性,ATCC和FDA,這些機構要求對用于制藥領域的實驗中(zhōng)所使用的材料—諸如細胞系—應該進行“身份鑒定”和純度測試。很多雜(zá)志(zhì)也要求使用細胞系的文章提供STR指紋圖譜數據。
FDA建議研究人員(yuán)在培養細胞的較早階段(細胞培養第一(yī)周)來鑒定細胞系的身份。細胞在被凍存前應再一(yī)次進行鑒定;對于活躍生(shēng)長的細胞,每兩個月應鑒定一(yī)次;文獻發表前也應對細胞系身份進行鑒定。
如果一(yī)個實驗室使用不止一(yī)種細胞系,則應在實驗開(kāi)始時,就要對所有的細胞系進行鑒定,以便排除交叉污染。
這樣将減少由于細胞系發生(shēng)交叉污染或身份誤認,将導緻實驗數據的無效或數據誤導。
3.如何進行細胞系鑒定?
細胞系鑒定目前主要基于身份認證委員(yuán)會的标準。依據該标準,可以通過多重熒光PCR技術,對人源8個STR位點以及1個性别決定位點進行檢測。
4.什麽時候需細胞系鑒定?
1)當建立或獲得一(yī)個新的細胞系時;
2)一(yī)個涉及到細胞試驗項目開(kāi)始/結束時;
3)在細胞凍存之前,或細胞已連續培養2~3個月時;
4)發表文章或申請課題經費(fèi)前;
5)細胞系表現不穩定或結果與預期差别較大(dà)時;
6)當實驗室使用超過一(yī)種細胞系時,所有細胞系先鑒定以排除交叉污染的可能。