細胞鑒定可以檢測細胞是否有交叉污染并确認細胞名稱或來源。你養的細胞株還是你原來的細胞株嗎(ma)？

      很多生(shēng)物(wù)醫藥的研究都采用培養細胞來進行，這些細胞可能是從細胞庫(如美國ATCC，American Type Culture Collection)得來，也可能是受贈于其它研究人員(yuán)。據估計，15-20%的時間裏，實驗中(zhōng)所使用的細胞已經不是原來的細胞系，或者與其它細胞系發生(shēng)了交叉污染。ATCC，以及其它細胞庫(ECACC)、(DSMZ)都收到過提交的“錯誤”的細胞系，盡管提交者把細胞系提交到上述機構之前，還經過了檢驗。然而，被證實這些細胞系還是鑒别錯了。顯然，細胞系遭到污染、特征鑒别錯誤，将會極大(dà)地威脅着基于這些細胞而發表的論文的質量和研究發現的正确性。

　　細胞系污染案例

　　1. Hela細胞來源于一(yī)位名叫Henrietta Lacks的宮頸腺癌患者，由于Hela細胞爲人類第一(yī)個被建立的細胞系享有非凡的地位所以它被分(fēn)派至世界各地，流行于各實驗室之間。直到如今，許多科學家都還未察覺到Hela細胞存在與其它細胞發生(shēng)交叉污染的可能性。Hela細胞具有極強和快速的生(shēng)長能力，以緻它會很快抑制其它細胞的生(shēng)長。1966年，在關于細胞、組織及器官培養的第二個十年回顧會議上，Gartler報道了這樣一(yī)個現象：據推測來源于18個獨立個體(tǐ)的細胞系全是Hela細胞，例如包括來源于正常腸上皮細胞(Int-407)、正常羊膜細胞(WISH)、正常肝細胞(Chang liver)、喉癌(Hep-2)和口腔癌(KB)。直到他們發現所使用的HeLa細胞系表達了Y染色體(tǐ)标記物(wù)之前，一(yī)切都進展得非常順利。

　　2. T24是另外(wài)一(yī)種生(shēng)長快速的膀胱癌細胞系。EVC304較早被認爲是自發轉化的人類正常内皮細胞系，但後來卻發現它是T24膀胱癌細胞系。令人感到意外(wài)的是，EVC304不是内皮細胞的這一(yī)論述對它作爲内皮細胞模型的公開(kāi)發表幾乎沒多大(dà)影響。推測來源于人類的前列腺癌細胞系TSU-Pr1和JCA-1也是來源于T24膀胱癌細胞系。這些研究發表在雜(zá)志(zhì)Cancer Research上，但它并不能阻止後來一(yī)篇TSU-Pr1作爲前列腺癌細胞系模型的研究論文發表在Cancer Research上。

　　3. DNA指紋分(fēn)析揭示NCI/ADR-RES細胞系實際上爲卵巢腫瘤細胞系OVCAR-8，而不是乳癌細胞系。大(dà)約有300篇已發表的論文使用了錯誤鑒定的NCI/ADR-RES細胞系。

　　4.一(yī)篇描述食管細胞系錯誤鑒定的論文宣稱：基于這些被污染的細胞而産生(shēng)的實驗結果導緻繼續的臨床試驗需招募EAC(食管腺癌)病人，以及需得到超過100多個刊物(wù)和至少三個NIH腫瘤研究所的承認，還牽涉到11個US專利。

　　态度改變

　　數百篇科學雜(zá)志(zhì)文章描述了細胞錯誤鑒定的事例，但直到現在，科學雜(zá)志(zhì)或資(zī)金管理部門還沒有采取根除此問題的行動。再者，作者通常會很不情願發表一(yī)項基于使用錯誤鑒定細胞的聲明。但在過去(qù)的兩年裏，一(yī)些期刊的态度開(kāi)始發生(shēng)改變，如In Vitro Cellular and Developmental Biology、International Journal of Cancer、Cell Biochemistry和Biophysics and the American Association for Cancer Research(AACR) journals要求細胞系在發表前需做鑒定。美國天主教大(dà)學Roland Nardone号召廣大(dà)研究機構進行細胞系的鑒定工(gōng)作。美國國立衛生(shēng)研究院(NIH)和美國癌症協會這樣的主要機構應該将細胞系鑒定作爲給予基金資(zī)助的條件，同時在主要雜(zá)志(zhì)中(zhōng)發表的基于細胞培養的相關研究也需要進行細胞系的鑒定。

　　細胞錯誤鑒定的根源

　　大(dà)部分(fēn)的細胞系在學術環境中(zhōng)被建立，組織培養通常被認爲是一(yī)種對技能少有要求的技術，其所用到的必要設備如流動櫃和孵育箱使用起來沒什麽限制。在這些情況下(xià)，嘗試建立一(yī)種新的細胞系通常會導緻交叉污染。在送至德國的微生(shēng)物(wù)和細胞培養收藏所的550個白(bái)血病和淋巴瘤細胞系中(zhōng)，59/395(15%)被初創者送來的細胞系以及23/155(15%)的二級來源是錯誤的。還有許多原因可以引起細胞培養物(wù)錯誤鑒定，每個實驗室都有可能發和，例如在常規操作中(zhōng)對細胞培養容器進行了錯誤标記。造成這種問題出現的原因有：實驗員(yuán)的工(gōng)作負荷、缺乏注意以及在細胞操作過程中(zhōng)的分(fēn)心.

　　培養物(wù)的交叉污染以及随後污染細胞的過量生(shēng)長是另一(yī)個引起細胞系錯誤鑒定的常見原因。這種情況可能是由于試劑的共用、反複使用相同的試管、在沒有充分(fēn)分(fēn)離(lí)每一(yī)細胞類型情況下(xià)同時對多個培養物(wù)進行操作。當交叉污染發生(shēng)時，一(yī)種細胞類型迅速生(shēng)長而超過另一(yī)種，在4-5次細胞傳代後，一(yī)個純的污染細胞培養物(wù)将會形成。

　　細胞鑒定-交叉污染檢測

　　評估由交叉污染或細胞錯誤鑒定而産生(shēng)多少誤導性和錯誤的研究是困難的。一(yī)項針對正在從事細胞培養的工(gōng)作人員(yuán)調查顯示：483例被調查者中(zhōng)，32%使用了Hela細胞，9%的人在不知(zhī)情下(xià)使用了Hela污染物(wù)，隻有33%的調查者對他們使用的細胞進行了鑒定。35%的人獲得細胞的途徑是其他實驗室，而不是大(dà)的細胞庫。

　　許多方法已被用來檢測交叉污染，包括同工(gōng)酶分(fēn)析、核型分(fēn)析、人類白(bái)細胞抗原(HLA)分(fēn)型，免疫分(fēn)型和DNA指紋識别。這些方法都可以鑒别出某一(yī)種細胞系，但是分(fēn)辨能力各不一(yī)樣。然而，這些方法在不同實驗室所得到的數據卻不盡相同，以緻沒有任何一(yī)種方法可以用來建立一(yī)個标準參考數據庫。

　　細胞鑒定-STR分(fēn)型檢測

　　許多實驗室利用STR分(fēn)型來鑒定人源細胞系。STR分(fēn)型是一(yī)種用來做親緣分(fēn)析的方法，它的原理是在一(yī)單管中(zhōng)同時擴增多個多态性DNA片段。STR位點是由不同數目重複單元組成的重複DNA序列。每一(yī)個STR位點均能被擴增且擴增産物(wù)标記上不同顔色的熒光，使得擴增産物(wù)很容易通過片段大(dà)小(xiǎo)和顔色來區分(fēn)。

　　3-5個堿基重複的DNA重複序列已常規性地用來做親緣鑒定、法醫鑒定、以及鑒定在20年之前的大(dà)災難中(zhōng)遇難的受害者。随後，STR分(fēn)型用于細胞鑒定中(zhōng)。STR分(fēn)型快速、經濟、易于自動化，能得到可重複的數據，且數據格式适合建立一(yī)個标準參考數據庫。由于快速、鑒定的細胞系結果明确，STR分(fēn)型的應用價值大(dà)。

　　STR分(fēn)型存在一(yī)個大(dà)的局限，就是它不能檢測來源于其他物(wù)種的污染細胞，哪怕是人類細胞被過生(shēng)長的其它物(wù)種細胞所覆蓋，用人類或高等靈長類特異性引物(wù)也不會有DNA擴增。如果應用于其它物(wù)種的STR分(fēn)型已被建立，在PCR中(zhōng)采用物(wù)種特異性引物(wù)可以用來檢測來源于其它物(wù)種的污染細胞，那麽STR分(fēn)型無疑可被用來鑒定污染細胞。