細胞STR分(fēn)型鑒定咨詢熱線:15901412183
2010年5月ATCCSDO(StandardsDevelopmentOrganization)工(gōng)作組在Naturereviewcancer雜(zá)志(zhì)上發表了題爲《Celllinemisidentification:thebeginningoftheend》前瞻性報道。以下(xià)是全文内容。
摘要:
細胞系作爲正常或腫瘤組織的模式細胞被廣泛應用于科學研究和藥物(wù)開(kāi)發,然而很大(dà)一(yī)部分(fēn)的細胞系被錯誤标記或被其它個體(tǐ)、組織、種系來源的細胞所替代,由于科學界無法解決此類問題以緻大(dà)量因使用錯誤鑒定的細胞系而導緻誤導或存在潛在錯誤的學術論文發表。通過近年來的努力而開(kāi)發出的STR分(fēn)型方法已成爲對人源細胞進行鑒定的标準方法,STR分(fēn)型的應用成爲根除細胞錯誤鑒定這一(yī)問題的重要一(yī)步。
細胞系作爲體(tǐ)外(wài)模型而被廣泛應用于生(shēng)物(wù)醫學研究。正确數據的獲得常常依賴于細胞系的特性,尤其是當它用來替代其來源者的組織時。令人感到驚訝的是,細胞錯誤鑒定的發生(shēng)率卻不低,以緻原來把某一(yī)細胞歸爲另一(yī)細胞系的來源者通常都是錯誤的?。細胞錯誤鑒定問題已有50年曆史,基于國際細胞庫的分(fēn)析數據顯示:1977年細胞錯誤鑒定率爲16%,1999年爲18%,直到最近幾年,應用于生(shēng)物(wù)醫學領域的細胞系需要鑒定的問題仍然很少有人關注。于是ATCC标準開(kāi)發組織工(gōng)作組ASN-0002(SDO,一(yī)個目前正在開(kāi)發人類細胞系鑒定标準的工(gōng)作組)成員(yuán)寫了這篇科學與社會文章。ATCCSDO成立于2007,旨在開(kāi)發最好的應用于生(shēng)命科學的标準,及使用一(yī)緻的工(gōng)序來平衡工(gōng)業界、政府、協調部門和學術界的意見。我(wǒ)(wǒ)們期望此标準草案能夠在2010年得到公衆的審查和評論,随後,最終草案被美國國家标準研究院(ANSL)批準。
這裏我(wǒ)(wǒ)們描述了細胞錯誤鑒定形成的原因、給科學界帶來的影響和曆史、,以及爲解決此問題所做的努力。我(wǒ)(wǒ)們讨論了目前能用于細胞鑒定的不同方法并推薦使用STR分(fēn)型來鑒定人類細胞系。或許因爲其重要性,一(yī)個通用的STR分(fēn)型數據庫正在建設當中(zhōng)。
細胞錯誤鑒定的發現
人類和動物(wù)細胞培養物(wù)的錯誤鑒定是一(yī)個長期的問題,最初意識到此問題可追溯到上世紀50年代。核型分(fēn)析和免疫學方法最先被應用于細胞鑒定,當大(dà)量的種系錯誤鑒定被報道後,促使ATCC在1962年建立細胞系鑒定庫。
種内的細胞在1962年還不能鑒别,到1966年StanleyGartler引入生(shēng)化多态性的概念來對人類細胞進行鑒别(基于同工(gōng)酶的表達)。1966年,在關于細胞、組織及器官培養的第二個十年回顧會議上,Gartler報道了這樣一(yī)個現象:據推測來源于18個獨立個體(tǐ)的細胞系卻全是Hela細胞(Hela細胞爲人類第一(yī)個被建立的細胞系),例如包括來源于正常腸上皮細胞(Int-407)、正常羊膜細胞(WISH)、正常肝細胞(Changliver)、喉癌(Hep-2)和口腔癌(KB)。Hela細胞來源于一(yī)位名叫HenriettaLacks的宮頸腺癌患者,由于Hela細胞享有非凡的地位所以它被分(fēn)派至世界各地,流行于各實驗室之間。因此,直到如今,許多科學家都還未察覺到Hela細胞存在與其它細胞發生(shēng)交叉污染的可能性。Hela細胞具體(tǐ)極強和快速的生(shēng)長能力,由于生(shēng)長過快以緻它會很快抑制其它細胞的生(shēng)長。
否認和自滿
對于Gartler的發現,一(yī)些人甚至那些應該知(zhī)道更多的科學家們都表現出了抵制和敵對的态度,但是有一(yī)位科學家WalterNelson-Rees,對Gartler的話(huà)引起了特别注意。Nelson-Rees承包了一(yī)家從屬于國家腫瘤研究院的細胞庫,他與同事們開(kāi)發出一(yī)種利用核型分(fēn)析來對細胞進行鑒定的方法,他在一(yī)系列發表的文章中(zhōng)指出:在送至細胞庫的培養物(wù)中(zhōng),據稱爲一(yī)個獨特的細胞培養物(wù)裏面卻存在大(dà)量的交叉污染,Nelson-Rees的工(gōng)作表明,由Hela細胞引起的交叉污染極爲普遍,甚至經過多年後所有的細胞系都可能被懷疑是Hela細胞,除非可以證明它不是。Nelson-Rees不僅在科學文獻中(zhōng)提出需要注意交叉污染問題,他還通過信函通知(zhī)受此問題影響的科學家。Nelson-Rees對細胞鑒定最後的貢獻于2009年發表(逝世後不久)。
當Nelson-Rees第一(yī)次公布他的發現時,一(yī)些科學家根本不予理睬甚至否認他的證據,并繼續發表包含錯誤信息的學術論文。結果,Nelson-Rees在想不出任何辦法下(xià)隻得對使用了污染細胞系的論文或個人進行了标注。在那個時代(也許今天),Nelson-Rees的行爲被認爲是非科學的,他受到了許多同僚的攻擊。他将自己标榜爲治安維持會會員(yuán),1981年,NIH終止了與他的合同。自從那以後,細胞錯誤鑒定現象愈演愈烈,問題逐步擴大(dà)。接下(xià)來的10至20年内,細胞庫分(fēn)發了許多錯誤命名的細胞。
評估由交叉污染或細胞錯誤鑒定而産生(shēng)多少誤導性和錯誤的研究是困難的。從1969到2004年,錯誤鑒定培養物(wù)的使用在PubMed數據庫中(zhōng)增加了大(dà)約10倍,而使用培養細胞發表的論文僅增加了2-2.5倍。到2004年,Hela細胞隻是冰山一(yī)角,許多其他細胞系在不同“外(wài)衣的僞裝”下(xià)盛行于世界各地實驗室。
一(yī)項針對正在從事細胞培養的工(gōng)作人員(yuán)調查顯示:483例被調查者中(zhōng),32%使用了Hela細胞,9%的人在不知(zhī)情下(xià)使用了Hela污染物(wù),隻有33%的調查者對他們使用的細胞進行了鑒定。35%的人獲得細胞的途徑是其他實驗室,而不是大(dà)的細胞庫。
在過去(qù)的超過50年的時間,對于細胞錯誤鑒定問題,盡管有人會自鳴得意,并在一(yī)些情況下(xià)人們最初的反應爲否定,但仍有一(yī)小(xiǎo)部分(fēn)的人緻力于補救此問題。在個人努力中(zhōng)其中(zhōng)占大(dà)部分(fēn)的是相關人員(yuán)寫信給編輯要求審稿人注意細胞錯誤鑒定問題,以及要求作者提供證據以證明在研究中(zhōng)使用的細胞系既沒有交叉污染也不是錯誤鑒定的細胞。但這些努力在Nelson-Rees的合同終止後大(dà)部分(fēn)都被忽視了,盡管當時DNA指紋識别技術的出現帶來了新的和更多再生(shēng)的方法,這一(yī)技術在90年代初期一(yī)再揭示了細胞錯誤鑒定的程度。
2004年,RolandNardone開(kāi)始了第二次的改革運動,他得到了後來成爲ATCC标準制定組織副主席的JosephB.Perrone的支持,JosephB.Perrone不僅爲他提供了許多的主意,并且還提供了激發這場改革運動的所需要的義憤。與其他相關的科學家一(yī)起,Nardone提出了一(yī)個全面而相互協調的倡議,以同時尋求引起對此問題本質和重要性的意識和請求受此問題影響的組織和個人的參與,這些組織包括NIH,HowardHughes醫學院。
案例和影響
交叉污染和錯誤鑒定已有一(yī)段很長的曆史,這其中(zhōng)有許多的案例,我(wǒ)(wǒ)們很難去(qù)判斷哪一(yī)個是最重要及代價最高的。
已被描述的經典案例是Hela細胞污染(關于Hela細胞污染有好幾個案例),令人驚奇的是,許多被Hela細胞污染的細胞系居然在一(yī)些備受尊敬的雜(zá)志(zhì)上仍被使用,而這一(yī)使用距離(lí)它們最先發現爲Hela細胞的時間長達40年之久。
T24是另外(wài)一(yī)種生(shēng)長快速的細胞系,它常常污染許多經推測來源于不同膀胱癌的細胞系。EVC304最先被認爲是自發轉化的人類正常内皮細胞系,但後來卻發現它是T24膀胱癌細胞系。令人感到意外(wài)的是,EVC304不是内皮細胞的這一(yī)論述對它作爲内皮細胞模型的公開(kāi)發表幾乎沒多大(dà)影響。
推測來源于人類的前列腺癌細胞系TSU-Pr1和JCA-1也是來源于T24膀胱癌細胞系。這些研究發表在雜(zá)志(zhì)CancerResearch上,但它并不能阻止後來一(yī)篇TSU-Pr1作爲前列腺癌細胞系模型的研究論文發表在CancerResearch上。
DNA指紋分(fēn)析揭示NCI/ADR-RES細胞系實際上爲卵巢腫瘤細胞系OVCAR-8,而不是乳癌細胞系。大(dà)約有300篇已發表的論文使用了錯誤鑒定的NCI/ADR-RES細胞系。NCI/ADR-RES包含在NCI60細胞,兩者STR分(fēn)型相同。
1篇描述食管細胞系錯誤鑒定的論文宣稱:基于這些被污染的細胞而産生(shēng)的實驗結果導緻繼續的臨床試驗需招募EAC(食管腺癌)病人,以及需得到超過100多個刊物(wù)和至少三個NIH腫瘤研究所的承認,還牽涉到11個US專利。
長達50年的壓制,爲什麽?
這裏有三大(dà)群體(tǐ)需對細胞錯誤鑒定負責:科學家個人、科學期刊、資(zī)金管理部門。在
過去(qù)50年大(dà)部分(fēn)時間裏,隻有科學家個體(tǐ)對此問題提出了抗議。然而要想擺脫許多科學家故意公然使用錯誤鑒定的細胞系這一(yī)結論是很難的,再者,作者通常會很不情願發表一(yī)項基于使用錯誤鑒定細胞的聲明。
JohnMaddox,Nature雜(zá)志(zhì)的編輯,在1980年針對引人注目的交叉污染問題寫了一(yī)篇評論,标題爲“科研工(gōng)作需爲誠信負責”。盡管他對此問題幾乎完全缺乏洞察力,但他提出建議:沒有理由懷疑衆所周知(zhī)的少數幾個案例在任何意義上隻是交叉污染問題的冰山一(yī)角。在相同的評論裏,一(yī)些科學家們像Nelson-Rees遭受诽謗,因爲這篇文章指出:如果這些文明行爲(即科研中(zhōng)的誠信問題)遭到自诩爲治安團成員(yuán)的破壞,那麽它将成爲一(yī)場災難。細胞系交叉污染的曆史暗示誠信并不像許多科學家們希望相信的它适用于世界各地科學界的那樣。
與此問題相關的科學雜(zá)志(zhì)編輯的回應繼續不斷地得到啓發。數百篇科學雜(zá)志(zhì)文章描述了細胞錯誤鑒定的事例,但直到現在,科學雜(zá)志(zhì)或資(zī)金管理部門還沒有采取根除此問題的行動。
一(yī)個很有影響力的組織培養期刊的編輯被邀請考慮将細胞鑒定作爲發表論文的必要條件,但他回應說:那将是财政自殺。其它期刊的編輯也拒絕考慮這一(yī)質控方案,他們認爲一(yī)旦引進這一(yī)發表論文的障礙,那些有意願投稿至他們雜(zá)志(zhì)的作者人數将會大(dà)大(dà)減少。
在過去(qù)的兩年裏,态度開(kāi)始發生(shēng)改變,一(yī)些期刊如InVitroCellularandDevelopmental
Biology、InternationalJournalofCancer、CellBiochemistry和BiophysicsandtheAmerican
AssociationforCancerResearch(AACR)journals要求細胞系在發表前需做鑒定。Nature雜(zá)志(zhì)指出:首先基金組織必須要求細胞進行鑒定并提供必要的資(zī)金。一(yī)旦他們這樣做了,Nature将會在文章發表之前要求細胞鑒定。與此同時,基金組織繼續對此問題置之不理。
基金組織是維持科學标準最有權力的部門,但令人驚奇的是,他們拒絕考慮處理甚至不承認細胞錯誤鑒定問題。例如,NIH發表于2007年的通告忽視了科學家個體(tǐ)和審稿人未能解決細胞錯誤鑒定這一(yī)問題。一(yī)位Nature編輯指出:這一(yī)通告隻不過讓人強迫接受這一(yī)現狀。
一(yī)些科學家個人嘗試去(qù)解決這一(yī)問題,但卻遭遇來自基金部門不予幫助的回應,他們要麽趨于否認要麽将問題弱化。來自CancerResearchUK的一(yī)位資(zī)深科學家最近的一(yī)項聲明提出:細胞錯誤鑒定問題每一(yī)年都有擡頭。基金部分(fēn)似乎已受到這個問題的威脅并對試圖解決這一(yī)問題的科學家們加以抵抗,另外(wài)基金部分(fēn)對那些試圖尋找解決方案的科學家予以非難以及使他們喪失名譽。
任何在美國或英國的支持生(shēng)物(wù)醫學研究的主要基金部門本應在過去(qù)的10年裏面根除細胞系錯誤鑒定問題,而根除這一(yī)問題所需經費(fèi)要少于科學與社會所公布的基金部門提供給每一(yī)項目的平均經費(fèi)。然而,這些基金部門一(yī)次又(yòu)一(yī)次地忽略,或是在某些情況下(xià)壓制有關這一(yī)問題的争論,并且繼續爲使用錯誤細胞的研究項目提供資(zī)助。有關基金部門對科學進行歪曲和欺騙控制這一(yī)角色可能存在更大(dà)的牽連。
對于細胞系錯誤鑒定問題不管是期刊還是基金部門都應是無法容忍的。有迹象表明,Nardone的“讨伐”運動正在不斷地獲得影響力,并且人類細胞系鑒定的标準将會成爲Nardone遺産中(zhōng)一(yī)個明确的證據。
細胞錯誤鑒定的根源
大(dà)部分(fēn)的細胞系在學術環境中(zhōng)被建立,在學術環境下(xià),組織培養通常被認爲是一(yī)種對技能少有要求的技術,其所用到的必要設備如流動櫃和孵育箱使用起來沒什麽限制。在這些情況下(xià),嘗試建立一(yī)種新的細胞系通常會導緻交叉污染是不足爲怪的。在送至德國的微生(shēng)物(wù)和細胞培養收藏所的550個個白(bái)血病和淋巴瘤細胞系中(zhōng),59/395(15%)被初創者送來的細胞系以及23/155(15%)的二級來源是錯誤的。可以推測大(dà)部分(fēn)二級來源的細胞系已被交叉污染或被初創者錯誤鑒定。
有許多緣由可以引起細胞培養物(wù)錯誤鑒定,每一(yī)個實驗室都存在風險。或許細胞錯誤鑒定最直接的原因就是在常規操作過程中(zhōng)對細胞培養容器進行了錯誤标記。造成這種問題出現的原因有:實驗員(yuán)的工(gōng)作負荷、缺乏注意以及在細胞操作過程中(zhōng)的分(fēn)心。
培養物(wù)的交叉污染以及随後污染細胞的過量生(shēng)長是另一(yī)個引起細胞系錯誤鑒定的常見原因。這種情況發生(shēng)的幾率在以下(xià)條件會增加:試劑的共用、在再喂養操作時反複使用相同的試管、在沒有充分(fēn)分(fēn)離(lí)每一(yī)細胞類型情況下(xià)同時對多個培養物(wù)進行操作。當交叉污染發生(shēng)時,一(yī)種細胞類型迅速生(shēng)長而超過另一(yī)種,在4-5次細胞傳代後,一(yī)個純的污染細胞培養物(wù)将會形成。
在使用其它物(wù)種的滋養層(例如小(xiǎo)鼠3T3細胞)來繁殖人類幹細胞或原始細胞時有意地共培養會導緻交叉污染或人類細胞系過生(shēng)長。正常情況下(xià),滋養層細胞處于無增殖狀态,但隻要生(shēng)長抑制程序不完全,它就會不斷繁殖并逐步取代人類細胞。體(tǐ)細胞雜(zá)交雖不常見但也會發生(shēng),如人類套細胞淋巴瘤細胞系NCEB-1就攜帶了小(xiǎo)鼠的七條染色體(tǐ)。
異種移植也會導緻細胞系交叉污染和錯誤鑒定,來自異種移植的複蘇細胞會被宿主動物(wù)細胞所替代。
一(yī)般而言,交叉污染最終的結果将會是少量适應細胞完全且快速的替代。兩個細胞系不能持續共存于同一(yī)個培養環境,除非它們是共生(shēng)關系,但這種情況據我(wǒ)(wǒ)們所知(zhī)還未有報道。一(yī)個細胞群經過許多次傳代後還能包含一(yī)個穩定的混合基因組,唯一(yī)已知(zhī)的情況是接續的體(tǐ)細胞雜(zá)交。
簡單、經濟的質控措施能夠阻止或至少會減少細胞錯誤鑒定的發生(shēng)。由于缺乏重視及未采用質控措施導緻細胞錯誤鑒定現象極其普遍。大(dà)量質控措施的實行以及相應文件的适當調整被認爲是生(shēng)物(wù)制藥領域出現相對較低細胞錯誤鑒定報道的因素。
交叉污染檢測
許多方法已被用來檢測交叉污染,包括同工(gōng)酶分(fēn)析、核型分(fēn)析、人類白(bái)細胞抗原(HLA)分(fēn)型,免疫分(fēn)型和DNA指紋識别。這些方法都可以鑒别出某一(yī)種細胞系,但是分(fēn)辨能力各不一(yī)樣。然而,這些方法在不同實驗室所得到的數據卻不盡相同,以緻沒有任何一(yī)種方法可以用來建立一(yī)個标準參考數據庫。
許多實驗室利用STR分(fēn)型來鑒定人源細胞系。STR分(fēn)型是一(yī)種用來做親緣分(fēn)析的方法,它的原理是在一(yī)單管中(zhōng)同時擴增多個多态性DNA片段。STR位點是由不同數目重複單元組成的重複DNA序列。每一(yī)個STR位點均能被擴增且擴增産物(wù)标記上不同顔色的熒光,使得擴增産物(wù)很容易通過片段大(dà)小(xiǎo)和顔色來區分(fēn)。STR分(fēn)型快速、經濟、易于自動化,能得到可重複的數據,且數據格式适合建立一(yī)個标準參考數據庫。由于快速、鑒定的細胞系結果明确,STR分(fēn)型的應用價值最大(dà)。
STR分(fēn)型—潛力及局限
3-5個堿基重複的DNA重複序列已常規性地用來做親緣鑒定、法醫鑒定、以及鑒定在20年之前的大(dà)災難中(zhōng)遇難的受害者。随後,STR分(fēn)型用于細胞鑒定中(zhōng)。用STR分(fēn)型來做細胞鑒定有幾大(dà)優勢。
腫瘤細胞系包含許多遺傳改變,因此用STR分(fēn)型來分(fēn)析腫瘤細胞系的标準必須與正常組織不一(yī)(見補充信息Box3)。腫瘤細胞通常會表現出雜(zá)合性丢失(即缺失一(yī)個等位基因以緻難以與純合子相區分(fēn)),另外(wài)由于DNA複制,腫瘤細胞可攜帶等位基因的多個拷貝。與此類似,在腫瘤細胞培養過程中(zhōng),腫瘤細胞系既可失去(qù)等位基因的一(yī)個拷貝,也可偶爾獲得一(yī)個拷貝。所以,相同細胞系的亞系可能會含有不同的STR分(fēn)型。
對比相同的等位基因,已往發表的數據表明,75%的一(yī)緻性已能鑒别出所有已知(zhī)的交叉污染細胞系,一(yī)緻性超過50%的兩個細胞系不會認爲是來源于不同個體(tǐ),因此,在單一(yī)細胞系和存在交叉污染的細胞系之間存在25%的“緩沖區”,任何細胞系隻要一(yī)緻性水平在50%和75%之間,它就應該認爲是可疑的。
在分(fēn)析人類細胞系基因型中(zhōng),其主要的問題包括雜(zá)合子峰高不平衡(即一(yī)等位基因的峰高或面積遠大(dà)于另一(yī)等位基因)、某一(yī)基因座出現多個等位基因、等位基因丢失(目的片段未能擴增)。由于腫瘤細胞系爲非整倍體(tǐ),所以其雜(zá)合子峰高不平衡以及在一(yī)個或多個基因座出現多個等位基因的現象非常典型。
基因分(fēn)型所需費(fèi)用是大(dà)家主要關心的問題,但是相對于細胞系的整個工(gōng)作來講其費(fèi)用就微不足道了。STR分(fēn)型的費(fèi)用包括DNA提取、STR位點的PCR擴增、毛細管電(diàn)泳分(fēn)離(lí)擴增片段和數據分(fēn)析。增加STR基因座的數目如從6個到15個将會達到一(yī)個非常高的分(fēn)辨率。
STR分(fēn)型存在一(yī)個大(dà)的局限,就是它不能檢測來源于其他物(wù)種的污染細胞,哪怕是人類細胞被過生(shēng)長的其它物(wù)種細胞所覆蓋,用人類或高等靈長類特異性引物(wù)也不會有DNA擴增。在PCR中(zhōng)采用用物(wù)種特異性引物(wù)可以用來檢測來源于其它物(wù)種的污染細胞。如果應用于其它物(wù)種的STR分(fēn)型已被建立(目前局限于少數幾個具有重要商(shāng)業價值的物(wù)種),STR分(fēn)型無疑可被用來鑒定污染細胞。
對于大(dà)部分(fēn)已被建立的細胞系,供體(tǐ)組織已不能獲得,那些被廣泛使用的細胞系其最初來源者要麽退休要麽已辭世。在這些情況下(xià),一(yī)種基于儲存于細胞庫中(zhōng)可能是最老的細胞群假想出現了。這些分(fēn)型将需要标記上“臨時”來指示缺乏對最初供體(tǐ)組織的分(fēn)型鑒定。
在下(xià)面描述的數據庫可用之前,能用來對比STR分(fēn)型的可用資(zī)源極爲有限。ATCC和DSMZ細胞庫網站,以及CLIMA(細胞系分(fēn)子鑒定整合數據庫)提供了一(yī)些信息,至少兩種系列的STR分(fēn)型數據已公布。目前,最有用的資(zī)源之一(yī)是AmandaCapes-Davis和IanFreshney收集的錯誤鑒定細胞系清單,這在歐洲細胞培養物(wù)收藏所(ECACC)網站上也可查看。所有的科研工(gōng)作者都應對照這一(yī)清單來核對他們正在使用的細胞系名稱。
交互式數據庫
有人提議建立一(yī)個旨在開(kāi)發可用STR分(fēn)型數據的數據庫,這些數據可作爲人類細胞系鑒定的數據。交互式數據庫任何人都可進入,但隻有數據庫管理員(yuán)才能對數據進行修改或補充。這個數據庫不僅提供DNA分(fēn)型,還能允許實驗室将他們的細胞系STR分(fēn)型數據與數據庫裏的細胞系數據相比較,這樣便于确保實驗數據的可靠性。
通用标準是組成一(yī)個好的數據庫的必備條件,應用細胞鑒定的标準可以建立起一(yī)個由每一(yī)個有确定STR分(fēn)型的單一(yī)細胞系組成的交互式數據庫,并爲STR分(fēn)型檢測以及分(fēn)析提供必備條件。标準制定委員(yuán)會的成員(yuán)将會與NCBI協作開(kāi)發交互式數據庫所需要的條件,數據庫由NCBI維護。數據庫最初隻包含科研人員(yuán)常用的并保存在大(dà)型細胞庫的500個已證實的細胞系。
每一(yī)個細胞系在被提交至數據庫之前都會确定其STR分(fēn)型。比對STR分(fēn)型數據最有效的數據庫會由一(yī)組常見的标記物(wù)組成。然而,并不是所有的數據都是收集相同的STR位點或是用同一(yī)代的測序儀器得到的。針對相同的STR标記使用不用引物(wù)組合是法醫和人身份鑒定中(zhōng)的慣例,美國的聯邦調查局聯合DNA索引系統(CODIS)就是采用13個核心STR位點組合來錄入數據的。爲了能維持進入CODIS的數據之間的整合,各實驗室必須使用CODIS認可的STR分(fēn)型試劑盒和儀器,并且嚴格按照質量保證标準來操作。CODIS認可的試劑盒已經曆了大(dà)量的驗證研究,包括旨在解釋使用不同引物(wù)組合時出現STR分(fēn)型差别的一(yī)緻性研究。相同的程序會是細胞STR分(fēn)型所必需的。
未來
從增加的數據可信性、隻需很少的時間和費(fèi)用,以及研究被錯誤鑒定的細胞系的所花費(fèi)的精力來看,細胞系STR分(fēn)型鑒定将會在科學研究中(zhōng)産生(shēng)重大(dà)影響。細胞系的精确鑒定在研發基于細胞下(xià)的醫學産品起到至關重要的作用,它能避免将人體(tǐ)細胞暴露于錯誤鑒定細胞中(zhōng)的風險。盡管這種錯誤鑒定大(dà)部分(fēn)可以通過遵循質控措施而避免,例如正确标記、在生(shēng)産基于細胞的醫學産品時采取跟蹤計劃,但是當用來證實一(yī)個來源于預期供體(tǐ)的細胞産品以及它被有意地與其它供體(tǐ)細胞混合時,利用可明确鑒定細胞和組織的标準方法将會提供安全保障。這個問題對于個體(tǐ)化醫療和應用基于幹細胞的技術(包括誘導多能幹細胞)非常重要。
沒有一(yī)個單一(yī)的方法可提供所有的信息來鑒定一(yī)個人類細胞系。STR分(fēn)型是這一(yī)時期的最佳代表,因此,随着新信息的可用,STR分(fēn)型标準将會不斷地改進。向任何人開(kāi)放(fàng)的交互式、可搜尋的數據庫将會大(dà)大(dà)減低錯誤鑒定細胞的使用率。基金部門和期刊也被鼓勵采取對使用錯誤鑒定細胞“零容忍”的政策并要求作者提供證據以支持其使用的爲正确的細胞系。
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