細胞培養過程中(zhōng)如果操作不當或者條件控制不合适見容易受到化學或者生(shēng)物(wù)因素的污染,常見的污染源有:
1.細菌污染
細菌污染是實驗室細胞培養中(zhōng)常見的污染,即使在細胞培養液中(zhōng)加入了抗菌素,也可能因爲操作不慎而引起污染。常見的有革蘭氏陽性菌,如枯草杆菌以及大(dà)腸杆菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中(zhōng)又(yòu)以白(bái)色葡萄球菌較常見。
培養細胞受細菌污染後,會出現培養液變混濁,pH改變。污染後細胞發生(shēng)病理改變,胞内顆粒增多、增粗,最後變圓脫落死亡。
2.真菌污染
真菌污染是細胞培養過程中(zhōng)最常見的一(yī)種,最常見的真菌有煙曲黴、黑曲菌、孔子黴、毛黴菌、白(bái)色念珠菌和酵母菌。
培養細胞受真菌污染後,可見培養液中(zhōng)漂浮着白(bái)色或淺黃色的小(xiǎo)點,有的散在生(shēng)長,培養液一(yī)般不發生(shēng)混濁;倒置顯微鏡下(xià)可見絲狀、管狀或樹(shù)枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養基中(zhōng),有的呈鏈狀排列。
真菌污染後,細胞生(shēng)長變慢(màn),但最後由于營養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。
3.支原體(tǐ)污染
支原體(tǐ)是介于細菌與病毒之間能獨立生(shēng)活的最小(xiǎo)微生(shēng)物(wù),最小(xiǎo)直徑0.2μm,一(yī)般過濾除菌無法去(qù)除它,光鏡下(xià)難以看清它的形态結構。開(kāi)始不易發現,能在偏堿條件下(xià)生(shēng)存,對青黴素有抗藥性。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間。
培養細胞受支原體(tǐ)污染後,部分(fēn)敏感細胞可見細胞生(shēng)長增殖變慢(màn),部分(fēn)細胞變圓,從瓶壁脫落。但多數細胞污染後無明顯變化,或略有變化,若不及時處理,還會産生(shēng)交叉污染。
4.病毒污染
組織細胞培養過程中(zhōng),如果沒有除去(qù)潛在的病毒,就會産生(shēng)病毒污染。目前,從原代猴腎細胞的培養中(zhōng)已發現不少于20種血清性病毒。
盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生(shēng)産疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大(dà)量生(shēng)産和疫苗、幹擾素等生(shēng)物(wù)制品制作中(zhōng)的難題。
5.非同種細胞污染
由于細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分(fēn)開(kāi),往往會使一(yī)種細胞被另一(yī)種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,緻使許多實驗宣告無效。